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实验室安全守则1

第一部分 植物发育相关突变体和转基因植株的获得及初步分析3

第一节 利用化学方法获得植物突变体及功能基因的克隆4

实验一 EMS诱变获得植物突变体库4

实验二 图位克隆技术7

实验三 TILLING技术11

第二节 利用农杆菌介导的植物转基因技术15

实验四 农杆菌培养、感受态细胞准备和质粒转化20

实验五 农杆菌介导的拟南芥转基因方法24

实验六 农杆菌介导的烟草转基因方法32

实验七 农杆菌介导的水稻转基因方法35

第三节 拟南芥T-DNA插入突变体的获得和鉴定40

实验八 拟南芥T-DNA插入突变体库的获得43

实验九 拟南芥T-DNA插入突变体的筛选——植株表型分析和鉴定45

实验十 T-DNA插入位点基因的克隆和鉴定——Tail-PCR51

实验十一 T-DNA插入突变体纯合体的鉴定61

实验十二 T-DNA插入突变体的互补实验65

第四节 多基因突变体的获得67

实验十三 拟南芥杂交技术68

第五节 目的基因RNAi及过量表达转基因植株的获得71

实验十四 RNAi原理及基本步骤71

实验十五 过量表达的原理及基本步骤75

实验十六 拟南芥RNAi及过量表达转基因植株的获得78

第二部分 植物发育相关突变体及转基因植株的验证和分析80

第一节 转基因植株DNA水平的鉴定80

实验十七 PCR方法验证外源基因转入植株81

实验十八 Southern杂交验证转基因植株中外源基因的拷贝数83

第二节 转基因植株mRNA水平的鉴定92

实验十九 Northern杂交分析基因的表达92

实验二十 RT-PCR方法分析基因的表达99

实验二十一 Real-time PCR方法分析基因的表达105

实验二十二 mRNA原位杂交技术111

第三节 转基因植株蛋白质水平的鉴定120

实验二十三 转基因植株蛋白质水平的检测（Western blot）121

实验二十四 植物组织免疫酶和免疫荧光技术125

第三部分 生物信息学方法及其他常用分子生物学技术128

第一节 生物信息学方法128

第二节 启动子分析134

实验二十五 启动子序列的克隆——染色体步移法134

实验二十六 启动子和GUS融合转基因植株的染色分析139

实验二十七 DR5::GUS融合转基因植株的染色分析143

第三节 定点突变获得突变体的方法144

实验二十八 利用QuikChange Site-directed Mutagenesis试剂盒获得定点突变基因145

第四节 蛋白质亚细胞定位技术——基因枪法149

实验二十九 基因枪法转化洋葱表皮细胞149

第五节 DNA和蛋白质互作的研究方法153

实验三十 CHIP技术161

第六节 蛋白质相互作用的研究方法166

实验三十一 酵母双杂交技术172

实验三十二 免疫共沉淀技术177

第四部分 植物组织培养技术182

实验三十三 植物培养基的配制182

实验三十四 烟草无菌苗的培养192

实验三十五 水稻种子愈伤组织的培养和幼苗的再生195

第五部分 植物发育生物学研究中常用的细胞学方法201

实验三十六 植物组织石蜡切片技术201

实验三十七 植物组织冰冻切片技术207

实验三十八 烟草小孢子发育过程的观察211

实验三十九 拟南芥花粉表型的分析220

实验四十 烟草大孢子发育过程的观察227

实验四十一 拟南芥胚珠透明技术——胚胎发育过程的观察230

实验四十二 烟草胚胎分离技术及胚胎发育过程的观察233

缩写词238

参考文献241