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第一部分 生物化学与分子生物学实验入门1

一、实验室规则1

(一)实验室安全规则1

(二)实验室卫生规则1

(三)学生守则2

二、常用仪器的使用方法2

(一)722S型分光光度计2

(二)752型紫外可见分光光度计5

(三)离心机6

(四)微量移液器7

(五)电子天平8

(六)Elx酶标仪9

(七)PCT-100PCR仪12

三、器皿的洗涤及要求17

(一)一般实验要求17

(二)分子生物学实验要求18

四、实验结果的记录及保存19

五、实验报告的完成20

六、实验成绩评分方法20

第二部分 生物大分子的制备及鉴定实验22

实验一 蛋白质的盐析分级分离及凝胶层析脱盐22

实验二 凝胶过滤层析法测定蛋白质的分子量25

实验三 醋酸纤维素膜电泳分离鉴定蛋白质30

实验四 蛋白质含量的测定32

实验五 琼脂糖凝胶电泳分离乳酸脱氢酶同工酶36

实验六 常规蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳38

实验七 蛋白质的双向电泳44

实验八 丹磺酰化法分析蛋白质N-末端氨基酸49

实验九 动物基因组DNA的分离纯化52

实验十 核酸的定量测定54

实验十一 DNA的Tm值测定59

实验十二 植物总RNA的提取62

实验十三 甲醛变性凝胶电泳鉴定RNA64

实验十四 离子交换柱层析分离核苷酸65

第三部分 酶动力学测定实验75

实验一 酵母蔗糖酶的制备75

实验二 DEAE纤维素柱层析纯化酶蛋白77

实验三 各级分蔗糖酶活性测定及纯化率的计算80

实验四 底物浓度对催化反应速度的影响及米氏常数Km和最大反应速度Vmax的测定83

实验五 反应时间对产物形成的影响87

实验六 pH值、温度、抑制剂对蔗糖酶活性的影响89

第四部分 免疫化学检测实验94

实验一 免疫血清的制备94

实验二 双向免疫扩散法测定抗血清效价97

实验三 微量免疫电泳100

实验四 单向定量免疫电泳102

实验五 微量酶联免疫法测定IgG104

实验六 免疫印迹法检测人IgG108

第五部分 分子生物学实验118

实验一 质粒DNA的提取118

实验二 质粒DNA的酶切122

实验三 琼脂糖凝胶电泳检测DNA124

实验四 大肠杆菌感受态细胞制备及转化127

实验五 目的基因片段的回收130

实验六 DNA重组134

实验七 重组子鉴定137

实验八 Southern吸印139

实验九 Southern杂交141

实验十 蛋白质的诱导表达及SDS-PAGE电泳检测146

实验十一 PCR扩增目的基因153

第六部分 开放及综合设计性实验156

实验一 还原糖的含量测定156

实验二 总糖含量的测定(苯酚-硫酸法)159

实验三 糖的硅胶G薄层层析161

实验四 血清总胆固醇的测定162

实验五 维生素B2(核黄素)荧光测定法164

实验六 酪蛋白的制备167

实验七 温度和pH对唾液淀粉酶活性的影响168

实验八 琥珀酸脱氢酶及丙二酸的抑制作用171

实验九 药用植物过氧化物酶同工酶分析及活性比较173

实验十 谷丙转氨酶的活性测定174

实验十一 离子交换法制备肝素177

实验十二 mRNA的分离180

实验十三 标记亲和素生物素法(BA-ELISA)183

实验十四 藻类多糖的结构与生物活性研究185

Cu2+胁迫条件对涡虫体内过氧化氢酶活性的影响188

学生综合设计性实验论文选阅188

不同家禽蛋类营养成分的比较195

新技术介绍201

(一)生物芯片简介201

(二)生命科学中的毛细管电泳203

(三)USING THE COMPUTER IN BIOCHEMICAL RESEARCH204

附录211

附录1 常用缓冲液的配制211

附录2 层析技术有关介质性质及数据214

附录3 SDS-PAGE标准蛋白质分子量220

附录4 硫酸铵饱和度计算221

附录5 细菌培养基、抗生素223